راه اندازی روش Real-time PCR بر پایهgreen SYBRجهت تعیین الل‌های HLA-DQ در بیماران مبتلا به سیلیاک

  سابقه و هدف: از عوامل ژنتیکی مهم در ابتلا به بیماری سیلیاک، حضور الل‌های HLA-DQ2 و HLA-DQ8 در افراد مبتلا می‌باشد. روش‌های مولکولی زیادی جهت تعیین این الل‌ها در دسترس می‌باشد اما این روش‌ها علاوه بر هزینه بالا، دارای مراحل متعددی هستند که استفاده از آن‌ها را دشوار کرده است، لذا هدف از این مطالعه، راه‌اندازی تکنیک ساده و سریع جهت تعیین الل‌های HLA-DQ در بیماران مبتلا به سیلیاک با روش SYBR g reen r eal- t ime PCR بود.   مواد و روش ‌ ها: به منظور تعیین نوع HLA-DQ و ارزیابی کارایی روش SYBR g reen r eal- t ime PCR ، DNA آن دسته از بیماران سیلیاکی که بیماری آن‌ها با استفاده از روش‌های سرولوژی و پاتولوژی تایید شده بود، استخراج شد. در مرحله بعد، از پرایمرهای اختصاصی جهت بررسی الل‌های HLA-DQA1*05 ، HLA-DQB1*02 و HLA-DQB1*0302 استفاده شد و نتایج به‌دست آمده با کیت‌های تجاری در دسترس مقایسه گردید.   یافته ‌ ها: با استفاده از این روش حضور الل‌های HLA-DQ2 و HLA-DQ8 با حساسیت و اختصاصی 100 درصد تعیین شد و نتایج حاصل از این روش در مقایسه با کیت‌های تجاری در دسترس با قدرت تفکیک پایین، کارایی بالاتری را نشان داد.   نتیجه ‌ گیری: روش SYBR g reen- r eal t ime PCR به همراه آنالیز منحنی ذوب آن، جهت شناسایی الل‌های HLA-DQ-2 و HLA-DQ8 کارایی مناسبی داشته و نسبت به روش‌های معمول HLA تایپینگ در ایران، سریع‌تر و آسان‌تر بوده و برای تشخیص این الل‌ها، درجه حساسیت و اختصاصی بالایی دارد.